分子标记（STR/SSR/ISSR/RAPD/T-RFLP/MSAP/SRAP/AFLP/MLPA）

服务简介

分子标记（Molecular Markers），是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接的反映。广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。包括STR/SSR/ISSR/RAPD/T-RFLP/MSAP/SRAP/AFLP/MLPA检测和实验项目。

RAPD(random amplified polymorphic DNA）即随机扩增多态性DNA标记，是1990 年发明并发展起来的，RAPD是建立在PCR (Polymerase Chain Reaction)基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。

T-RFLP (Terminal restriction fragment length polymorphism，末端限制性长度多态性)技术是发明于上世纪末用于分析环境微生物多样性的一种新方法，其原理是在RFLP引物的一端加上荧光标记进行PCR、产物经酶切后用3730XL 测序仪检测，检测结果以峰的位置和面积表示微生物的种类和数量，进而反映目标微生物群落的组成及时空动态，目前T-RFLP技术已被广泛用于分析各种环境中某类微生物的群落结构。

MSAP甲基化敏感扩增多态性技术由Reyna-lópez 等报道，并被用于检测双相型真菌的DNA甲基化，它是在扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism, AFLP)技术的基础上建立起来的。

SRAP相关序列扩增多态性(Sequence—related AMPLIFIED polymorphism)是一种新型的基于PCR的标记系统，为显性标记，是由美国加州大学蔬菜系Li与Quiros博士于2001年在芸薹属作物开发出来。该标记通过独特的双引物设计对基因的ORFs(Open reading frames)的特定区域进行扩增，因不同个体以及物种的内含子、启动子与间隔区长度不同而产生多态性。

STR/SSR（Microsatellite，微卫星标记）也称为短串联重复序列（STR）或简单重复序列（SSR），是广泛分布在真核生物基因组中的简单重复序列，因此被认为是继限制性片段长度多态性（RFLP）之后的第二代遗传标记，广泛应用于遗传制图、基因定位、法医学鉴定、人类学以及遗传病的诊断等许多领域的研究。

ISSR(inter-simple sequence repeat)是一种在简单重复序列(SSR)基础上发展起来的新型的分子标记，由加拿大蒙特利尔大学的Zietkiewicz等(1994)提出。

AFLP（amplified fragment length polymorphism，扩增片段长度多态性）是由荷兰科学家Pieter Vos 等于1995 年发明的分子标记技术，是基于PCR 技术扩增基因组DNA限制性片段，基因组DNA 先用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DNA 片段的末端，它结合了RFLP 和PCR 技术高效性特点，用荧光标记的引物进行PCR 扩增，产物进行毛细管电泳检测，可使某一品种出现特定的DNA 谱带，得到某物种DNA 多态性的指纹图谱。

MLPA（multiplex ligation-dependent probe amplification，多重连接探针扩增）于2002 年由Schouten 等首先报道，是近几年发展起来的一种针对待检DNA 序列进行定性和半定量分析的新技术，基本原理包括探针和靶序列DNA 进行杂交，之后通过连接、PCR 扩增，产物通过毛细管电泳分离及数据收集，分析软件对收集的数据进行分析最后得出结论，目前已经应用于多个领域、多种疾病的研究。

主要流程

STR/SSR/ISSR

DNA提取引物设计

荧光引物设计合成

PCR扩增

PCR产物电泳检测

3730XL检测

数据分析

RAPD/T-RFLP/MSAP/SRAP

DNA提取

荧光引物合成

PCR扩增

PCR产物电泳切胶回收

酶切

3730XL检测

数据分析

AFLP

DNA提取与质检

酶切

加接头连接

连接产物PCR

PCR产物电泳检测

3730XL检测

数据分析

MLPA

订制探针

DNA提取与质检

连接

PCR

PCR产物电泳检测

3730XL检测

数据分析

订购信息

服务名称	周期	报价	说明
STR/SSR/ISSR实验服务	引物设计、PCR、检测、数据分析等	4-6周	询价
RAPD/T-RFLP/MSAP/SRAP实验服务	包括引物设计、PCR、酶切、检测、数据分析等	3~5周
AFLP实验服务	包括订制试剂盒、酶切、PCR、检测、数据分析等	3~5周
STR/SSR引物开发	至少开发10对有效引物	6~8周