透射电子显微镜TEM
透射电子显微镜TEM实验服务：超薄切片制样+TEM电镜观察(提供3个视野，每视野3张图片，询价。
透射电镜是一种高分辨率、高放大倍数的显微镜，是研究动植物胞内超微结构表征的重要工具，更是材料科学研究的重要手段，能提供极微细材料的组织结构、晶体结构等方面的信息。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备更薄的超薄切片（通常为50～100nm）。对于动植物样本其制备过程与石蜡切片相似，但要求极严格。
测试项目：
1、动植物细胞内部的超微结构表征
2、鉴定病毒颗粒、外泌体、噬菌体等
3、观察纳米颗粒
【透射电镜取材注意事项】
在生物医学超微结构观察中，透射电镜是必不可少的技术手段。样品制备作为其中关键的一环，周期长且过程复杂，取材作为样品制备的第一步，其操作成功与否直接关系到整个实验的成败。现将取材过程中应该注意的问题总结如下，如果因取材不规范导致的实验失败，本公司概不负责！
一、 动植物组织取材注意事项
取材关键点：
1、快---样品离体后1 min内浸入固定液中，将预冷的戊二醛固定液提前准备好；
2、准---根据研究目的准确选取切取部位；
3、小---快速切取1 mm3大小的目标组织块，若组织块过大，会影响固定效果；
4、冷---尽量在低温条件下取材，降低酶的活性，减少组织自溶；取材后将样品放入4℃保存的2.5%的戊二醛固定液中；
5、损伤小---选用锋利的器械取材，防止组织受到机械损伤。
其中对于一些特殊组织，如脑、心脏等组织，先灌注固定后再取材。
送样要求：快速准确的切取组织块后，固定于2.5%的戊二醛固定液中（保证在1.5 ml尖头EP管中，戊二醛至少为1 ml），4℃固定2 h或者过夜。
二、细胞取材注意事项
1、 贴壁细胞：用细胞刮轻轻刮下细胞，尽量不要来回反复刮；也可将细胞消化下来（但注意减少胰酶用量及消化时间，以免损伤细胞）。然后将细胞悬液置于1.5 ml 尖头EP管中离心，一般为1000 rpm，3-5 min（具体转速及时间根据细胞种类不同稍有不同，但以不破坏细胞结构为前提）。离心之后保证细胞饼为绿豆或者米粒大小，或者在尖头EP管中高度为3-4 mm即可（细胞量至少为106，但也不要过多），吸去上清，沿管壁慢慢加入1 ml 2.5%的戊二醛固定液（4℃），切记不要将细胞饼吹散。4℃保存2h或者过夜。
2、 悬浮细胞、菌液：可直接按细胞悬液的操作步骤进行。
3、 固体培养基培养的菌类：可直接将菌落挑取到PBS中，制成悬液之后进行以上操作。
送样要求：收集好的细胞饼或者菌块，固定于2.5%的戊二醛固定液中（保证在1.5 ml尖头EP管中，戊二醛至少为1 ml），4℃固定2 h或者过夜。
需客户提供的材料：
1、 按规范操作获取的实验样品；将EP管用封口膜封好（防止管口漏液），用报纸或者气泡膜将EP管包裹，放入含有冰袋的泡沫盒中，要防止EP管直接接触冰袋，避免样品结冰影响观测结果。同时要将EP管固定好，防止运输过程中细胞饼散开。此外为保证实验结果，请将每组样品准备两份，并编号加以区分。
2、 认真详细填写测试单，并提供参考图片或者参考文献。打印出的测试单需与样品一同邮寄。
固定液注意事项：
戊二醛母液务必选用电镜专用的，之后用0.2 M的磷酸缓冲液将母液配成2.5%，PH为7.3-7.4，4℃避光保存。
【仪器、材料与试剂】：
器材和仪器 JEM-1200EX(120KV)透射电子显微镜、超薄切片机、恒温箱、真空抽泵机、400目铜网等
材料和标本 组织、细胞样本均由客户提供。
试剂 2.5％戊二醛(0.1mol／L(pH7.4)二甲砷酸钠缓冲液配制)、1％锇酸、30％、50％、70％乙醇溶液、80％、90％、95％、100％丙酮溶液、环氧树脂包埋剂、柠檬酸铅染液、双蒸水。
【实验内容】：
一．取材：
组织块小于1立方毫米、细胞饼及菌块为绿豆或者米粒大小(或者在尖头EP管中高度为3-4 mm)
二．固定：
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
三．脱水：
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮 室温 15-20分三次
四．包埋：
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五．固化：
37度烘箱内 过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察、拍片
由于生物样品含水太多，在电镜中会被真空蒸发掉从而破坏了结构，所以需要一些能够把水温和取代掉、并且自身没有结构的物质，这就是树脂包埋剂。正因为生物脆弱、结构容易破坏，所以才需要温和的制样方法，方法才这么复杂。生物电镜制样就是最主要的工作，看电镜倒是次要的。以下是生物样品超薄切片的流程图：
